摘要或動機

在一般文獻中，都以0.1M 的Ca2+ 溶液製作勝任細胞，但本實驗卻發現分子量較大的質體使用0.1M 的Ca2+ 溶液並不具最佳的效果，而以0.25M 的Ca2+ 溶液效果最佳，不過這是質體於二次水中進行轉型作用的前提下。因此在考慮實用性下，本組將質體放在Ligation Buffer 中進行轉型作用，卻發現其成功率下降至約質體於二次水中進行實驗效果的八分之一。接著，本組發現Ligation Buffer 中的Tris-HCl 會抑制轉型效率。所以，本組改用MOPS 及HEPES 取代Tris-HCl作為Ligation Buffer 中緩衝溶液的成分，發現質體於MOPS 或HEPES 之緩衝液中較質體置於Tris-HCl 中之轉型效率有2-3 倍之差異。本組建議往後相關領域在進行實驗時，不妨將Ligation Buffer 的Tris-HCl 改為MOPS，或將Ligation Buffer 中已完成與外來DNA 連接的質體純化，再置於二次水中，並以0.25M 的Ca2+溶液製備的勝任細胞進行細菌轉型實驗。