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Screening, Isolation, and Characterization of Fluorescent Proteins from Nudibranchs

Fluorescent proteins are used to label and tag tumor cells. These are also used in molecular cloning methods, and in monitoring cellular processes. However, the Philippines does not have a local source of fluorescent proteins, and thus imports these expensive chemicals from other countries. Possible sources of fluorescent proteins may come from marine organisms and certain plants. This work presents the screening, isolation, and characterization of fluorescent proteins from a potential local source—nudibranchs. The pigments of nudibranchs function to make their different body parts, as well as the cerata, brilliantly colored for defense and protection as in camouflage and aposematic behavior. The pigmentation in the skin of the nudibranchs was used as the fluorescent protein source. Crude protein extracts from the seven species of nudibranchs collected from Mabini, Batangas, Philippines were run through Reversed- Phase High Performance Liquid Chromatography (HPLC) for screening. Graphs of the absorbance of the seven species showed which species exhibit the most number of aromatic amino acids, the main component of fluorescent proteins. The species with the highest absorbance at 280 nm, which is Chromodoris willani, was run through the HPLC again for recovery and collection of fractions. The fractions were examined through fluorescence microscopy, wherein the samples were filtered at three emission ranges, the first at 450-470nm,the second at 515-545 nm, and the third at 600-650 nm, which corresponds to blue, green, and red, respectively. The proteins which emit at the said ranges were the only component allowed to pass through. The results, which are images of the excited proteins, showed that fluorescent proteins are present in the fractions of Sample 6—Chromodoris willani.

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讓神明保佑“泥”!金紙灰水泥砂漿試體試驗

「讓神明保佑“泥”!金紙灰水泥砂漿試驗」是藉由簡易實驗設計,測出取代或添加不同比例金紙灰對水泥砂漿試體強度的影響,瞭解金紙灰可否取代部分水泥及細骨材,達到廢物利用,同時降低工程材料的成本增加經濟效益,以符合綠建築之永續宗旨。前期試驗證實:金紙灰水溶液為鹼性,其化學成分有:SiO2(18.08%)、Al2O3(12.23%)、Fe2O3(1.30%)、CaO(39.79%)等類似水泥的成分。研究結果顯示:添加少量(添加率10%以下)金紙灰將有助於早期強度的提升,若添加過量則產生負面影響減低強度。而本研究試體晚期強度普遍不佳,應與金紙灰過量鹼性成分和燒失量太大有關,倘若能在材料的取得技術或後處理做改進與提升,將更有助於提升金紙灰再利用的價值。

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廢棄電蚊拍回收應用

電蚊拍因電源開關故障而導致不能使用,我們往往就將電蚊拍器丟棄,其實只要稍加修理改裝即可拿來做靜電實驗。國中課程曾簡單介紹靜電學,為了進一步研究這課題並讓學生可作中學,我們利用回收廢棄電蚊拍加以改良組裝成教具,並設計以下幾個實驗組:電蚊拍電壓測量 、尖端放電、靜電除塵器、電子風、靜電單擺、電子風車、靜電馬達。以幾個元件簡易組合即可做數個靜電學實驗,這是我們主要創意。

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『空氣與燃燒』的再研究

本項研究是延伸自五年級上學期「空氣與燃燒」這一單元﹐ 我們以雙氧水和水果作用之後產生氧氣為研究的重點﹐從實驗中發現課本中以線香燃燒的時間來測量氧氣產生量的方法不容易做出結果﹐所以我們也研究出氧氣的測量計﹐可以比較準確的測量出氧氣的產生量﹐此外﹐我們也實驗出常見的水果中﹐哪些水果產生的氧氣比較多﹐哪些水果產生的氧氣比較少﹐PH 值較高的水果﹐氧氣產生的量比較多﹐PH 值較低的水果﹐氧氣產生的量比較少﹐此外﹑除了水果之外﹐校園內的植物的葉﹑根﹑種子及莖也可以和雙氧水作用來產生氧氣﹐而且效果更好。

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黑豆奶優酪乳抗氧化性之研究

本實驗研究的目的分為兩部份:一部份是探討雙叉桿菌在豆奶與牛奶發酵基質中的生長情形包括生長菌數測定、pH 值與可滴定酸度(%)之測定、耐酸性試驗、耐膽鹽性試驗,比較雙叉桿菌(Bifidobacterium longum B6 及15708)在四種發酵基質(【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】、【黑豆奶(100%)】、【黑豆奶(50%)+牛奶(50%)】、【牛奶(100%)】)中的生長情形,評估雙叉桿菌是否適合以黑豆奶為發酵基質來製作出接受度高的黑豆奶優酪乳;另一部份則是探討雙叉桿菌在以豆奶與牛奶為發酵基質的優酪乳其發酵前與發酵後之抗氧化活性,包括還原力之測定、清除DPPH 自由基能力之測定、螯合銅離子能力之測定,探討含有不同濃度雙叉桿菌菌體(活菌)與豆奶所提供的抗氧化活性,是否會因發酵作用而有差異。結果顯示:(一) 生長菌數測定:B. longum B6,15708 兩株菌在四種培養基中的生長順序如下:【牛奶(100%)】>【黑豆奶(50%)+牛奶(50%)】>【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】>【黑豆奶(100%)】。在【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】優酪乳中生長情形比在【黑豆奶(100%)】生長情形佳。(二) pH 值、可滴定酸度(%)之測定:兩株菌種在四種發酵基質中產酸情形相類似,【黑豆奶(100%)】的pH 值很明顯高於【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】、【黑豆奶(50%)+牛奶(50%)】、【牛奶(100%)】等三種優酪乳,且差異顯著。兩株菌種在四種發酵基質中的最終發酵可滴定酸度大小順序為:【牛奶(100%)】>【黑豆奶(50%)+牛奶(50%)】>【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】>【黑豆奶(100%)】。(三) 耐酸性試驗:【黑豆奶(100%)】優酪乳於pH2.0 環境下,不論是B. longum B6 或15708 皆不能生長,耐酸性很低,可是只要在豆奶中添加少量(1%)的葡萄糖,皆能明顯提高兩株菌種對酸的耐受性與在【牛奶(100%)】的耐受性一樣好。(四) 耐膽鹽性試驗:兩株菌種B. longum B6、1570 對膽鹽之耐受性均很高為72.52%~92.62%,尤其以B. longum 1570 在【黑豆奶(100%)】基質對膽鹽之耐受性最高為92.62%。(五) 還原力之測定:在稀釋10 倍的四種基質中,不論發酵前或發酵後的還原力皆以【黑豆奶(100%)】為最高,【牛奶(100%)】為最低,實驗數據顯示發酵後的還原力比未發酵前的還原力增加不多,由此可推論雙叉桿菌菌體所貢獻的還原力不及豆奶、牛奶所貢獻的還原力多。(六) 清除α,α-Diphenyl-β-picrylhydrazyl ( DPPH‧ )自由基能力之測定:在濃度稀釋10 倍時,含有B. longum B6,15708 菌的四種優酪乳對DPPH‧自由基清除率大小順序為【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】>【黑豆奶(100%)】>【黑豆奶(50%)+牛奶(50%)】>【牛奶(100%)】。(七) 螯合銅離子能力之測定:不論接種何種菌,【黑豆奶(100%)+1%葡萄糖】的銅離子螯合率比【黑豆奶(100%)】其銅離子螯合率高很多,接近2 倍之多,顯示只要在豆奶中添加少量的葡萄糖即可提高優酪乳的銅離子螯合能力。

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海蟑螂的生態探討

奏湖是個海島,在這兒隨時的可以看到一大批為興趣、為娛樂、甚至為生活的垂釣者。釣魚是一門很大的學問,釣某種魚一定要用某一種餌料都是固定的;海邊垂釣,海蟑螂是用得最普遍的活餌之一。仔細觀察海蟑螂我們發現了很多有趣的問題,例如:(一)海蟑螂的雌雄如何辨別?(二)如何產生下一代?(三)牠們以什麼為食?(四)為什麼在堆滿垃圾的岸邊最多?( 五)為什麼太亮、太乾燥的地方很少?(六) 夏天時數量極多,冬天都跑到那裡去了?是冬眠嗎?(七)在海邊有沒有更省時省力的誘捕方法?(八)有可能在實驗室內繁殖嗎?這一連串的問題引發了我們觀察及做此實驗的興趣!

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乙烯水果熟不熟

我們從化學課本及參考資料了解到製備乙烯的方法,再從已知的方法中設計並改良出較佳收集乙烯的方式。製出的乙烯先用點火燃燒證明氣體的可燃性,再用溴水褪色證明的確是乙烯。最後利用強氧化劑(過氧化氫,過錳酸鉀),與乙烯做非勻相反應,可以觀察到高濃度的乙烯和強氧化劑間的反應有明顯的變化,利用此變化的觀察及數據的收集,作為此次研究的指標,來印證乙烯和水果熟成的相關性,進而希望藉此指標(簡單又方便的檢驗方式)作為水果保存的依據,並希望日後能找出簡單又有效的方式提高水果的保存期限。我們選用常見又易於觀察的水果-香蕉,並將上述的兩種強氧化劑(過氧化氫、過錳酸鉀),分別放在密閉容器中,在室溫下,希望氧化劑能反應掉香蕉所釋放的乙烯氧體,或降低乙烯濃度,以期達到減緩香蕉外表熟成(香蕉外表變黑)的目的;沒想到過氧化氫超出我們意料(並沒有如預期減緩香蕉熟成)反而是整個外表熟成加速(香蕉外表變黑速度更快),而兩組實驗組(香蕉釋放的乙烯分別在過氧化氫和過錳酸鉀的反應下)與對照組的外表熟成和香蕉內部甜度關係也有些連帶變化,雖超出我們預期,卻又有令人意想不到的結果,因為過錳酸鉀在開始實驗一天後香蕉內部甜度就有明顯增加,而後甜度增加率卻逐日下降!我們再將相同環境下,皆放入氧化劑(分成有香蕉及無香蕉兩組)經香蕉外表熟成後,再分別對剩下的氧化劑做滴定,先排除氧化劑在空氣中自然反應的變因後,發現有香蕉的實驗組與沒有香蕉的對照組的確有些差距,也間接證明了氧化劑的確是有與水果所釋放的乙烯反應。

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STATIN 類降血脂藥物對血管平滑肌細胞一氧化氮合成?的基因調控作用

動脈硬化是個致病率和致死率相當高的慢性發炎疾病。HMG-CoA 還原酵素抑制劑 纇藥物,簡稱statin, 是一類強效的降血脂藥物,而且在臨床上對於心血管疾病有廣泛的 治療效果。然而近年來的研究報導指出,statin 會有如此廣效治療效果,其原因不僅僅 是因為它的降血脂能力,而是statin 也具有抑制發炎作用的效果。雖然臨床上已經證實 statin 可以減緩動脈硬化的病程,但是statin 對於誘發型一氧化氮合成酵素(iNOS)表現的 調控機制還不明確。有文獻指出NOS 代謝產物nitric oxide (NO)可以改善血流,而可能 在動脈硬化上扮演保護角色。值得一提的是雖然適量 NO 有維持血管恆定的功能,過 量時則會造成血壓過低休克的現象,這就是細菌感染後因內毒素 lipopolysaccharide (LPS) 作用引發敗血性休克的主要原因之一。在本實驗中,我們使用fluvastatin、lovastatin、 pravastatin 和 atorvastatin 這四種statins 來探討它們對於血管平滑肌細胞由LPS 及IL-1β 誘導iNOS 基因表現的影響。我們發現,statin 可以抑制LPS 所誘發的NO 和iNOS 表現, 但卻會促進IL-1β所誘發的反應。NF-κB 在iNOS 的基因調控上扮演重要的角色,而在 探討NF-κB 被LPS 和IL-1β活化的情形中,statin 同樣會促進IL-1β活化NF-κB,但抑制 LPS 活化NF-κB。我們也發現fluvastatin 對於IL-1β所引發NO 的產生、iNOS 的表現、 NF-κB 的活化,以及p65 向細胞核移動的促進作用,在ROCK 抑制劑Y-27632 的處理後 可以看到相同的現象。IKK kinase assay 顯示Y-27632 對於LPS 所促進的IKK 活性影響 很小,但是會促進IL-1β的活化作用。接著,在ROCK 的活性方面,LPS 會抑制原本已 表現的ROCK 活性, 而相反的,IL-1β會增加ROCK 的活性。總括來說,這些結果顯示 ROCK 在血管平滑肌細胞中扮演IKK/NF-κB 的負向訊息調控者角色,而這個機制在LPS 和IL-1β的訊息傳遞路徑中有不同的調控。即ROCK 以負向調控機制角色影響IL-1β的 訊息傳遞,卻不存在於LPS 的情況中。就是因為透過反轉這個負向調控的機制,statins 3 和ROCK 抑制劑對於LPS 及IL-1β引發血管平滑肌細胞的iNOS 表現,呈現相反的調控 結果。這些作用可能參與statin 預防血管再阻塞,抗發炎,抗動脈硬化的作用。此外Statin 抑制LPS 的iNOS 表現作用或許將來可運用於治療敗血性休克。利用基因微陣列分析也 偵測到一些受fluvastatin 正向或負向調控的基因,目前我們正朝鑑定基因的表現改變及 確認其功能,生理意義進行實驗中。 The 3-hydroxy-3-methylglutaryl (HMG)-CoA reductase inhibitors, statins, are potent inhibitors of cholesterol synthesis and have wide therapeutic use in cardiovascular diseases. Recent evidence, however, suggests that the beneficial effects of statins may extend beyond their action on serum cholesterol levels. Although statins have been shown to reduce progression of atherosclerosis, little is known about mechanism by which statins affect iNOS expression. Optimal level of NOS product, NO, possesses the anti-inflammation and anti-proliferation effects in atherosclerosis, while large amount of NO contributes to the septic shock in response to bacterial endotoxin, lipopolysaccharide (LPS). In this study, we investigated the effects of fluvastatin, lovastatin, pravastatin and atorvastatin on IL-1β- and LPS-induced NO production in cultured rat vascular smooth muscle cells (VSMC). We found statins can inhibit LPS-induced iNOS expression and NO production, while they can potentiate IL-1β-elicited responses. In studying the activity of NF-κB, which plays an important role for iNOS gene induction, we found that fluvastatin can increase IL-1β-induced p65 nuclear translocation and NF-κB activity, while inhibit those induced by LPS. The potentiation effects of fluvastatin on IL-1β-induced NO production, iNOS expression, NF-κB activation and p65 nuclear translocation were all mimicked by a ROCK inhibitor, Y-27632. IKK kinase assay showed that Y-27632 itself has minimal effect on LPS-induced IKK activation, while enhances the response of IL-1β. Studies on examining ROCK activity showed LPS can downregulate constitutive ROCK activity, while IL-1β oppositely increases ROCK activity. Taken together these data suggest ROCK is a crucial negative regulator of IKK/NF-κB signaling pathway in VSMC, and this negative control is existing in the action IL-1β, but is absent in the action of LPS. Through abrogating the function of this negative regulator, statins and ROCK inhibitor thus differentially regulate iNOS expression induced by LPS and IL-1β in VSMC. These results suggest that stimulation of iNOS expression in the presence of IL-1β might contribute to the beneficial effects of statins in atherosclerotic process in terms of vasodilation, anti-inflammation and inhibition of smooth muscle cell proliferation. In contrast, the diminishing effect on LPS-induced NO response possibly may provide new therapeutic strategy in sepsis. Al these results strengthen the pleiotropic actions of statins in anti-inflammation and anti-atherosclerosis. Preliminary microarray analysis further revealed several genes either upregulated or downregulated by fluvastatin. The identification of these genes and studying their functional roles in atherosclerosis are currently in progress.

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「岸」藏玄機~探討在不同條件下離岸堤的作用

經過實驗的設計探討,我們發現:無設置離岸堤打上岸\r 的波明顯比任何一組有設置離岸堤的波痕高,說明了離岸堤\r 確實能阻擋海浪侵蝕海岸。而離岸堤的設置,在海岸旁的距\r 離、離岸堤間的間距、水中的高度、方位及消波塊的密合度\r 等都會影響到對海浪的阻擋效果。\r 研究結果發現:設置離岸堤較佳的條件是離海岸愈近、\r 離岸堤間距愈小、露出水面愈高、與海岸形成某種夾角、消\r 波塊的密合度越大及增加離岸堤長度都能增加阻擋海浪的成\r 效。但是消波塊使用的個數太多時,將造成成本過高及景觀\r 的破壞,也是值得考量的。\r 建議在未來設置離岸堤時也應將當地海水流動的方向、\r 海水潮汐高度變化等列入考量,以使「離岸堤」發揮最大的\r 功效。

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黏菌的研究

「黏菌」實在是一種很奇異的生物。在詳讀中山科學大辭典第八冊植物學的「黏菌植物群」後,發現很多問題值得研究。如:(一)黏菌子實體形態到底如何?孢子又是什麼呢?什麼是細絲體?偽細絲體又是什麼?孢子萌發法如何呢?(二)原生質體構造如何呢?在顯微鏡下又是什麼樣子?原生質如何流動呢?(三)同種黏菌真的可以癒合嗎?同種但不同品種可癒合嗎?又不同種可癒合嗎?(四)平常培養黏菌時,若水加多了,原生質體生長會受阻礙。當水分散失後,會形成休眠體(sclerotium )。如果將原生質體放在不同滲透壓的溶液中培養,其生長情況又如何呢?(五)「黏菌植物群」一文中,提到原生質體流動時之極性( Polarity )與 K+離子濃度有關,而且前端濃度較大(註 l )。那原生貿體有趨化性嗎?(六)一般教科書上,都提到原生質體平時長在背光處,等到成熟後,就爬到有光處形成子實體。那黏菌有負趨光性嗎?形成子實體真的是要爬向光照下嗎?(七)一般培養基,都是用乾葉培養基,但是卻避免使用有乳汁或有芳香氣味的樹葉。為什麼呢?有乳汁或有芳香氣味的樹葉真得對黏菌有害嗎?(八)休眠體到底是什麼呢?成因如何?又是如何形成的呢?(九)子實體如何形成?根據以上種種問題,使我產生研究的動機,展開下列各項實驗。

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氣體擴散實驗的進一步探討:自然擴散 v . s 通孔擴散

在國中理化課本第一冊,實驗 6 - 3 :「氣體的擴散」一節中,陳述了氨與氯化氫兩種氣體的自然擴散現象,由於擴散速率不同,故其反應後之產物氯化銨比較靠近氯化氫一邊,但經過多次,多組的實驗所得結果不盡相同,即氯化銨所產生的位置,有的很靠近氯化氫這一端,有的卻較靠近玻璃管中央,其原因如何?是否與實驗所用玻璃管徑有關?長短有關?甚至於是否與鹽酸或氨水的濃度或使用量有關?為了了解這些問題,我們作了以下的實驗。

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燃料電池的製作及研究

偶然在 NASA 的網站上,得知在太空梭上是以燃料電池作為供應電能的裝置,和課程中曾經提到有關燃料電池的內容,有許多互通之處,因此引起我們一探究竟的動機。燃料電池的特點是直接以一般燃料如氫氣、甲醇等為原料,將原本燃料燃燒所要釋放的化學能,不經過熱能的形式,直接轉換成電能。如此來,大人的減少能量在轉換過程中的損耗,而能有極佳的能量轉換效率,同時沒有下完全燃燒所帶來的污染,乾淨又環保,符合新時代的需求。現在除了太空梭之上的應用以外,先進國家更已發展出汽車用的燃料電池,以取代傳統的內燃機。燃料電池這樣先進的供應電能裝置,實在讓人想親眼目睹,不過很可惜,課本中對燃料電池只有大略敘述和簡圖說明,缺乏實際的照片讓人一睹為快。同時又因為取材不易造價太高、體積過大不易攜帶等原因,不但在日常生活中無緣一見,連在課堂上,老師也無法拿出一個燃料電池來展示,實在令人失望。於是興起製作一個簡易的燃料電池作為展示模型的想法,以說明其構造原理及功能,增加大家對燃料電池的認識。

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